一、PCR污染的四种来源

1、标本或模板之间的交叉污染

   A、容器被污染；

   B、模板放置时，由于密封不严溢于容器外；

   C、容器外粘有模板而造成相互间交叉污染；

   D、模板吸取过程中，因气溶胶或者其他原因引起移液器污染，从而导致交叉污染。

2、PCR试剂污染

   PCR试剂配置过程中，移液器、容器、水等原因造成试剂被PCR核酸模板污染。

3、PCR扩增产物污染（最常见）

   A、PCR产物拷贝量大，极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性；

   B、PCR产物气溶胶污染（最常见）

4、实验室中克隆质粒污染

 克隆质粒浓度高（刚提取完的质粒浓度可达到1011）另外在纯化过程中需要用较多的实验耗材和仪器，污染的可能性也很大；

二、实验室污染的防治

1、每次实验需设置阴性质控品；

2、实验室需严格进行分区保证每区仪器设备专区专用不得出现混用情况；

3、实验室人员及物品严格按照从试剂准备区到标本制备区到基因扩增区单向流动进行，不得逆向；

4、实验操作结束后应立即进行实验台面的清洁；；

5、加样时需严格按照防污染加样进行，避免加样过程中造成的交叉污染。

三、实验室污染的处理办法

如实验室发生污染情况要去除污染，首先最重要的是保持连续通风，保证扩增产物片段能顺利扩散出去。其次可采用稀酸处理法，对实验室器材具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤；再次采用紫外照射法，紫外波长（nm）一般选择254/300nm，照射高度不易超过90cm，需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大；实验室台面、超净工作台应用10%次氯酸钠（84）溶液擦拭清洁。如果污染长时间不能消除，建议更换另外厂家的PCR试剂进行检测，因为每个厂家的引物设计区域不一样；一般情况下，一家试剂公司的扩增产物不会在另外一家厂家的引物设计区域内，因此不会造成产物污染的假阳性。